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AAV血清型開發，助力基因治療！

小V前期已經為大家介紹了維真生物特有的AAV血清型快速篩選試劑盒，本期將向大家介紹如何篩選新的AAV血清型。

腺相關病毒（AAV）的多種特點如：組織特異性、良好的擴散性、低免疫原性、高安全性和穩定性，使其成為基因治療的首選載體。AAV的血清型是由AAV的衣殼蛋白決定的，天然的AAV衣殼有成百上千種，不同的衣殼蛋白（AAV血清型）提供了多樣性的組織侵染能力，這為避開基因治療宿主已有的對某些衣殼蛋白的免疫抗性提供了可能，但這也為利用AAV進行基因治療的項目開發造成一些困難。較早用于基因治療的AAV（如2型和5型）可以侵染多種組織和細胞，且已沒有專利保護，但仍有多達50-60%人群具有這些AAV的抗體或細胞免疫，從而限制了這些AAV用于基因治療。新發現的非人靈長類的AAV（如8型和9型），雖然感染人群很少，但都處于專利保護期。

不同的AAV血清型具有一定的組織感染特異性，然而這種組織特異性比較低，通常AAV可以廣泛地感染多種組織和細胞，這為如何避免過多感染非目標組織，利用AAV進行基因治療造成很多困難。

1. 通過搜索文獻和正在進行的臨床試驗來確定可選用的AAV血清型， 匯集了正在進行的基因治療臨床試驗，通常都可以找到選用的AAV血清型的資料。

2. 利用維真生物特有的AAV血清型篩選試劑盒，檢測與驗證AAV血清型對靶組織的侵染特異性。

4. 利用維真生物的基因混編（gene shuffling）AAV 血清型文庫及AAV衣殼蛋白表面展示文庫進行特定方法注射、特定組織的定向演化（directed evolution screen），篩選新的AAV血清型。

圖2 定向演化篩選到的對小鼠大腦GFAP陽性細胞具有特異性侵染能力的AAV血清型

利用維真生物的基因混編AAV 血清型文庫，經多輪體外與體內篩選，得到一種新的AAV血清型。經小鼠大腦定點注射，三周后取腦組織，切片染色觀察。 A. AAV攜帶的Cre基因激活小鼠體內DIO RFP 的表達。 B. RFP 與小膠質細胞Marker  Iba1共標記。 C. RFP 與星形膠質細胞Marker  GFAP共標記。可見RFP與GFAP可以共標記，但并不與Iba1共標記，反映了新的AAV血清型對GFAP陽性的星形膠質細胞的特異性侵染。

5. 維真生物收集了大約200種自然存在AAV血清型衣殼蛋白基因的克隆。目前業界對這些AAV血清型的組織和細胞感染能力尚沒有深入研究，有很大可能存在比目前已知血清型包裝效率更高，對組織特異性更高的新的血清型。