AAV在腦組織中的靶向策略（應用篇）
· 案例一(yi) ·
“TNF-α-dependent neuronal necroptosis regulated in Alzheimer’s disease by coordination of RIPK1-p62 complex with autophagic UVRAG”
阿爾茨海默病(bing)(bing)(AD)是(shi)(shi)一種常見(jian)的(de)(de)神(shen)(shen)經(jing)退(tui)行性(xing)(xing)疾病(bing)(bing)，臨(lin)床表(biao)現為認知(zhi)(zhi)(zhi)功(gong)能(neng)障礙和(he)記憶(yi)力減(jian)退(tui)等(deng)，其(qi)病(bing)(bing)理特征(zheng)包(bao)(bao)括Aβ蛋白(bai)沉積(ji)、Tau蛋白(bai)過(guo)度磷酸化、神(shen)(shen)經(jing)炎癥(zheng)和(he)神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)等(deng)。研究表(biao)明，AD發(fa)(fa)病(bing)(bing)的(de)(de)病(bing)(bing)理過(guo)程可能(neng)與神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)和(he)自(zi)噬有關(guan)。神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)是(shi)(shi)AD的(de)(de)主要特征(zheng)，程序性(xing)(xing)細胞(bao)壞(huai)(huai)(huai)死(si)與AD的(de)(de)發(fa)(fa)病(bing)(bing)機制相關(guan)，然而(er)AD中誘(you)導(dao)神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)的(de)(de)機制尚不清(qing)楚。自(zi)噬受(shou)損導(dao)致Tau蛋白(bai)的(de)(de)積(ji)累，這是(shi)(shi)包(bao)(bao)括AD在(zai)內的(de)(de)大(da)多數(shu)神(shen)(shen)經(jing)退(tui)行性(xing)(xing)疾病(bing)(bing)（NDs）的(de)(de)特征(zheng)。然而(er)，目(mu)前對AD發(fa)(fa)病(bing)(bing)機制中自(zi)噬途徑(jing)和(he)神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)之間可能(neng)的(de)(de)相互作(zuo)用知(zhi)(zhi)(zhi)之甚少。TNF-α作(zuo)為關(guan)鍵促炎因子，其(qi)誘(you)導(dao)的(de)(de)炎癥(zheng)可能(neng)對神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)死(si)亡(wang)產生不利(li)影響，但(dan)在(zai)AD發(fa)(fa)病(bing)(bing)過(guo)程中TNF-α的(de)(de)升高是(shi)(shi)否能(neng)引起(qi)神(shen)(shen)經(jing)元(yuan)(yuan)壞(huai)(huai)(huai)死(si)還尚未(wei)可知(zhi)(zhi)(zhi)。
圖1. 阿爾茨海默病中神經元壞死的調控機制
本(ben)研究利用(yong)來(lai)自AD患者的腦組(zu)織和(he)(he)AD小(xiao)鼠模型，通(tong)過(guo)免疫(yi)組(zu)織化學 (IHC) 染色和(he)(he)免疫(yi)印跡(ji)法測定(ding)壞死(si)信號(hao)通(tong)路中(zhong)關鍵基因的表達(da)，發(fa)現(xian)TNF-α/TNFR1信號(hao)通(tong)路在AD神(shen)經(jing)元(yuan)壞死(si)激活中(zhong)發(fa)揮(hui)作用(yong)。在TNF-α刺激下(xia)，積(ji)累(lei)的p62 招募(mu) RIPK1并(bing)誘(you)(you)導(dao)其自我寡聚(ju)，激活下(xia)游 RIPK1/RIPK3/MLKL級(ji)聯(lian)反應，導(dao)致神(shen)經(jing)元(yuan)壞死(si)。進一步研究發(fa)現(xian)，p62的異常積(ji)累(lei)是由TNF-α誘(you)(you)導(dao)的UVRAG下(xia)調(diao)(diao)介導(dao)的自噬(shi)損(sun)傷引起的。通(tong)過(guo)注射(she)AAV載體上調(diao)(diao)UVRAG的表達(da)，可以抑(yi)制(zhi)(zhi) AD細胞和(he)(he)小(xiao)鼠模型中(zhong)神(shen)經(jing)元(yuan)壞死(si)，并(bing)改(gai)善(shan)認知功能。本(ben)研究揭示了AD發(fa)病過(guo)程中(zhong)神(shen)經(jing)元(yuan)壞死(si)和(he)(he)自噬(shi)機制(zhi)(zhi)之(zhi)間的聯(lian)系，為AD的臨(lin)床干預提供了潛在的靶點，同(tong)時也為其他NDs的細胞死(si)亡調(diao)(diao)節機制(zhi)(zhi)的探索提供了基礎。
為(wei)探究AD患(huan)者腦內TNF-α水(shui)(shui)平的(de)升高是否會導致神(shen)經元的(de)壞(huai)(huai)死(si)(si)(si)，作者檢(jian)測(ce)了AD患(huan)者和小鼠(shu)的(de)腦組織中(zhong)(zhong)MLKL和p-MLKL（壞(huai)(huai)死(si)(si)(si)標(biao)志物）的(de)表(biao)達(da)，發現在AD中(zhong)(zhong)細(xi)胞壞(huai)(huai)死(si)(si)(si)確實被激(ji)(ji)活(huo)。通(tong)過在小鼠(shu)側腦室(shi)注射TNF-α，發現高水(shui)(shui)平的(de)TNF-α可以增加p-MLKL的(de)表(biao)達(da)并激(ji)(ji)活(huo)壞(huai)(huai)死(si)(si)(si)。使用AAV9對TNFR1（TNF-α受體(ti)）進(jin)行(xing)敲低，發現TNFR1敲低后(hou)能導致p-MLKL表(biao)達(da)水(shui)(shui)平的(de)降(jiang)低，提示TNF-α/TNFR1信號通(tong)路在AD神(shen)經元壞(huai)(huai)死(si)(si)(si)過程中(zhong)(zhong)發揮(hui)重要作用。
圖2. TNF-α/TNFR1誘導神經元壞死
研(yan)(yan)究人員發現(xian)在(zai)TNF-α誘(you)導(dao)(dao)下(xia)，p62積累并激(ji)活(huo)下(xia)游 RIPK1/RIPK3/MLKL級聯反應，導(dao)(dao)致了神(shen)經元(yuan)壞死(si)，而p62的(de)(de)異常積累是(shi)由UVRAG下(xia)調介導(dao)(dao)的(de)(de)自噬流(liu)受(shou)損引起的(de)(de)。為進(jin)一步(bu)探究UVRAG在(zai)AD小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)神(shen)經元(yuan)壞死(si)中的(de)(de)作用(yong)(yong)，研(yan)(yan)究者利用(yong)(yong)AAV載(zai)體在(zai)原代(dai)神(shen)經元(yuan)中對UVRAG進(jin)行了過表(biao)達，結果發現(xian)UVRAG的(de)(de)過表(biao)達明(ming)顯降低了TNF-α誘(you)導(dao)(dao)的(de)(de)MLKL磷(lin)酸(suan)化。通過在(zai)AD小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)海馬(ma)區注射AAV-UVRAG，發現(xian)p62與MLKL的(de)(de)磷(lin)酸(suan)化水平均顯著降低。此外，UVRAG的(de)(de)過表(biao)達明(ming)顯改善(shan)了AD小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)的(de)(de)學習和記(ji)憶功能障礙(ai)。以上結果表(biao)明(ming)，上調UVRAG可(ke)抑制AD小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)神(shen)經元(yuan)壞死(si)并改善(shan)認(ren)知功能，提示(shi)UVRAG可(ke)能是(shi)AD干預的(de)(de)潛在(zai)靶點。
圖3. UVRAG抑制原代神經元和AD小鼠中的神經元壞死
· 案例二 ·
“Metabotropic glutamate receptor 5 inhibits α-synuclein-induced microglia inflammation to protect from neurotoxicity in Parkinson’s disease”
帕金森(sen)病(bing)（PD）是(shi)常見的(de)(de)(de)(de)神(shen)(shen)經(jing)(jing)退行性(xing)疾病(bing)，已有研究(jiu)表明，α-突觸蛋(dan)白(bai)(α-syn)誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)小膠質(zhi)細(xi)胞(bao)活化(hua)是(shi)PD發(fa)(fa)病(bing)的(de)(de)(de)(de)重(zhong)(zhong)要因(yin)素(su)之一，代謝型谷(gu)氨酸受體(ti)5（mGluR5）及其(qi)(qi)信號通(tong)路在(zai)保護神(shen)(shen)經(jing)(jing)元免受神(shen)(shen)經(jing)(jing)炎(yan)(yan)癥(zheng)中發(fa)(fa)揮(hui)重(zhong)(zhong)要作(zuo)(zuo)用，且mGluR5可(ke)能在(zai)α-SYN誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)PD神(shen)(shen)經(jing)(jing)炎(yan)(yan)癥(zheng)和神(shen)(shen)經(jing)(jing)毒性(xing)的(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)病(bing)機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)中起重(zhong)(zhong)要作(zuo)(zuo)用，但其(qi)(qi)具(ju)體(ti)調控機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)尚不明確。為(wei)探(tan)討mGluR5在(zai)α-SYN誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)小膠質(zhi)細(xi)胞(bao)炎(yan)(yan)癥(zheng)中的(de)(de)(de)(de)作(zuo)(zuo)用和機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)，作(zuo)(zuo)者通(tong)過過表達α-SYN來激活小膠質(zhi)細(xi)胞(bao)，發(fa)(fa)現mGluR5的(de)(de)(de)(de)激活部分(fen)抑制(zhi)(zhi)(zhi)了α-SYN誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)炎(yan)(yan)癥(zheng)反應，保護小膠質(zhi)細(xi)胞(bao)免受神(shen)(shen)經(jing)(jing)毒性(xing)。此外，α-SYN通(tong)過與溶酶體(ti)結合來促(cu)進mGluR5的(de)(de)(de)(de)降解(jie)機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)在(zai)PD動物模(mo)型中同樣(yang)存在(zai)。這些(xie)發(fa)(fa)現為(wei)解(jie)密mGluR5調控α-SYN誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)小膠質(zhi)細(xi)胞(bao)炎(yan)(yan)癥(zheng)機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)，探(tan)究(jiu)PD未(wei)知的(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)病(bing)機(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)提供(gong)了新(xin)的(de)(de)(de)(de)思路。
為確(que)定mGluR5在(zai)α-syn誘導(dao)(dao)的(de)體內小(xiao)膠(jiao)質細(xi)胞激(ji)活中的(de)功能(neng)作用，作者利(li)用AAV9-α-syn誘導(dao)(dao)PD大鼠模(mo)型，并對其進(jin)行行為評估及病理(li)(li)生理(li)(li)學分析(xi)，發(fa)現α-syn過表達(da)(da)(da)組從第(di)(di)8周(zhou)(zhou)至(zhi)第(di)(di)16周(zhou)(zhou)出(chu)現顯(xian)著的(de)進(jin)行性(xing)(xing)功能(neng)障(zhang)礙，且(qie)過表達(da)(da)(da)α-syn，能(neng)導(dao)(dao)致mGluR5表達(da)(da)(da)降低，同(tong)時TH表達(da)(da)(da)改(gai)變；此外(wai)小(xiao)膠(jiao)質細(xi)胞中的(de)炎(yan)(yan)性(xing)(xing)因子iNOS、IL-1β和TNF-α的(de)表達(da)(da)(da)水平在(zai)注射后(hou)10天開始(shi)升高(gao)，4周(zhou)(zhou)時達(da)(da)(da)到(dao)峰值，8周(zhou)(zhou)后(hou)影(ying)響消失，這說(shuo)明在(zai)PD的(de)發(fa)病早(zao)期伴隨著反(fan)應性(xing)(xing)小(xiao)膠(jiao)質細(xi)胞的(de)高(gao)度局部炎(yan)(yan)癥(zheng)(zheng)(zheng)反(fan)應。為進(jin)一(yi)步確(que)定炎(yan)(yan)癥(zheng)(zheng)(zheng)干預在(zai)PD早(zao)期的(de)作用，作者在(zai)第(di)(di)4周(zhou)(zhou)炎(yan)(yan)癥(zheng)(zheng)(zheng)高(gao)峰期時利(li)用MEPT（mGluR5拮抗劑(ji)）或尿(niao)酸(suan)鹽處理(li)(li)，結果發(fa)現MEPT處理(li)(li)阻斷了mGluR5的(de)活性(xing)(xing)并加劇了炎(yan)(yan)癥(zheng)(zheng)(zheng)反(fan)應，而尿(niao)鹽酸(suan)處理(li)(li)減緩了炎(yan)(yan)癥(zheng)(zheng)(zheng)反(fan)應。綜(zong)上，在(zai)AAV-α-syn誘導(dao)(dao)的(de)PD模(mo)型中，mGluR5的(de)激(ji)活在(zai)介導(dao)(dao)神(shen)經(jing)保護的(de)抗炎(yan)(yan)反(fan)應中起著關鍵作用。
圖4. mGluR5在AAV-α- sync誘導的大鼠PD模型中具有抗炎作用
· 案例(li)三 ·
“PHLDA1 promotes microglia-mediated neuroinflammation via regulating K63-linked ubiquitination of TRAF6”
PD作(zuo)(zuo)為(wei)(wei)一種常見(jian)的(de)年齡相關(guan)性(xing)神經退行(xing)(xing)性(xing)疾病，以黑質致(zhi)密部（SNc）中(zhong)(zhong)多巴胺能(neng)(DA)神經元的(de)進(jin)行(xing)(xing)性(xing)丟失為(wei)(wei)特征。小(xiao)膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)導的(de)神經炎癥(zheng)在(zai)PD等神經退行(xing)(xing)性(xing)疾病的(de)進(jin)展中(zhong)(zhong)發(fa)揮著重(zhong)要作(zuo)(zuo)用。目前普遍認為(wei)(wei)，TLR4/TRAF6/NF-κB或MAPKs信(xin)號(hao)通路在(zai)小(xiao)膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)活化介(jie)(jie)導的(de)神經炎癥(zheng)的(de)調節中(zhong)(zhong)發(fa)揮關(guan)鍵作(zuo)(zuo)用。已知PHLDA1（人Plecstrin同源域家族(zu)A成員(yuan) 1，也稱T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)死亡相關(guan)基因51，TDAG51）參(can)與了對(dui)TLR（Toll樣受體）激活的(de)免疫(yi)反(fan)應(ying)的(de)調節，然而，PHLDA1在(zai)免疫(yi)應(ying)答中(zhong)(zhong)的(de)確切分子信(xin)號(hao)和功能(neng)作(zuo)(zuo)用尚未完全闡明(ming)，特別是(shi)在(zai)小(xiao)膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)激活和神經退行(xing)(xing)性(xing)疾病中(zhong)(zhong)的(de)功能(neng)作(zuo)(zuo)用尚不清楚。
研(yan)(yan)究(jiu)人員發現(xian)在體內和(he)體外小膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)中，PHLDA1的(de)(de)表(biao)達在炎(yan)(yan)(yan)癥刺激(ji)下迅速增(zeng)加。利用(yong)(yong)腺相(xiang)(xiang)關(guan)病毒(du)(AAV)下調(diao)PHLDA1可改善MPTP誘導的(de)(de)小鼠運動(dong)缺(que)陷(xian)并抑制神經炎(yan)(yan)(yan)癥。在體內，發現(xian)LPS誘導的(de)(de)TNF-α、IL-1β、iNOS和(he)COX-2等促炎(yan)(yan)(yan)基因表(biao)達在PHLDA1敲除(chu)的(de)(de)小膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)中降低。機制研(yan)(yan)究(jiu)表(biao)明，LPS刺激(ji)后(hou)，小膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)中PHLDA1表(biao)達增(zeng)加，導致與(yu)(yu)TRAF6的(de)(de)直(zhi)接相(xiang)(xiang)互作用(yong)(yong)，并增(zeng)強(qiang)其K63連接的(de)(de)泛素(su)化介(jie)(jie)導的(de)(de)NF-κB信號(hao)通路激(ji)活。PHLDA1缺(que)乏可干擾TRAF6 k63的(de)(de)泛素(su)化并抑制小膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)炎(yan)(yan)(yan)癥反應。本研(yan)(yan)究(jiu)表(biao)明了PHLDA1與(yu)(yu)小膠(jiao)(jiao)質細(xi)(xi)胞(bao)介(jie)(jie)導的(de)(de)DA神經毒(du)性(xing)有關(guan)，提示PHLDA1可能(neng)是一種有效的(de)(de)神經炎(yan)(yan)(yan)癥調(diao)節(jie)劑，為治療(liao)神經炎(yan)(yan)(yan)癥相(xiang)(xiang)關(guan)疾病(如PD)提供新的(de)(de)藥物靶點。
為探究(jiu)PHLDA1在PD中(zhong)的(de)(de)作用，研(yan)究(jiu)人員利用AAV介導(dao)的(de)(de)shRNA對小(xiao)(xiao)鼠體內PHLDA1進(jin)行(xing)(xing)了(le)敲降(jiang)(jiang)，5周后檢測(ce)發(fa)現AAV9-shPhlda1組(zu)(zu)小(xiao)(xiao)鼠，PHLDA蛋白與(yu)mRNA水平均顯著下降(jiang)(jiang)。感染(ran)小(xiao)(xiao)鼠給予MPTP誘(you)導(dao)PD樣(yang)(yang)表(biao)(biao)型，發(fa)現抑(yi)制PHLDA1的(de)(de)表(biao)(biao)達(da)無法改(gai)善小(xiao)(xiao)鼠基礎運動功能，但能顯著減弱(ruo)MPTP誘(you)導(dao)的(de)(de)行(xing)(xing)為損傷，對ShPhlda1小(xiao)(xiao)鼠中(zhong)腦的(de)(de)TH免疫(yi)組(zu)(zu)化染(ran)色和(he)免疫(yi)印(yin)跡進(jin)一步證實了(le)其保(bao)護作用，這(zhe)表(biao)(biao)明抑(yi)制PHLDA1的(de)(de)表(biao)(biao)達(da)可(ke)顯著減輕MPTP所(suo)致的(de)(de)多(duo)巴胺能神(shen)經元和(he)行(xing)(xing)為損傷。有趣(qu)的(de)(de)是，ShPhlda1小(xiao)(xiao)鼠SNc中(zhong)Iba-1（小(xiao)(xiao)膠質細胞(bao)(bao)標(biao)志物）陽(yang)性(xing)(xing)細胞(bao)(bao)數量和(he)總(zong)蛋白水平也降(jiang)(jiang)低，且ShPhlda1小(xiao)(xiao)鼠中(zhong)炎性(xing)(xing)因子的(de)(de)表(biao)(biao)達(da)降(jiang)(jiang)低。這(zhe)些結果表(biao)(biao)明，SNc中(zhong)PHLDA1的(de)(de)耗竭保(bao)護了(le)DA神(shen)經元并抑(yi)制了(le)神(shen)經炎癥，最(zui)終減弱(ruo)了(le)MPTP誘(you)導(dao)的(de)(de)PD樣(yang)(yang)表(biao)(biao)型的(de)(de)發(fa)展。
圖5. SNc中PHLDA1敲除可顯著改善MPTP誘導的DA神經元損傷和運動障礙
· 案例四 ·
“Upregulation of KDM6B contributes to lipopolysaccharide-induced anxiety-like behavior via modulation of VGLL4 in mice ”
神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)精神(shen)障(zhang)礙(ai)如(ru)焦(jiao)慮(lv)(lv)癥(zheng)(zheng)，近年(nian)來已發(fa)展成為(wei)(wei)日益嚴重的(de)(de)公共心理健(jian)康問(wen)題。有證據表(biao)明，LPS誘導(dao)的(de)(de)神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)炎癥(zheng)(zheng)與(yu)焦(jiao)慮(lv)(lv)樣行(xing)(xing)(xing)為(wei)(wei)之間(jian)存在因(yin)果關系，阻(zu)斷(duan)神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)炎性介(jie)質已被認(ren)為(wei)(wei)是治療(liao)焦(jiao)慮(lv)(lv)的(de)(de)一種潛在方法。近年(nian)來，表(biao)觀遺傳學被認(ren)為(wei)(wei)在神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)精神(shen)障(zhang)礙(ai)如(ru)焦(jiao)慮(lv)(lv)癥(zheng)(zheng)中起著至關重要(yao)的(de)(de)作用，其中組蛋白H3K27me3去甲基化酶KDM6B作為(wei)(wei)一個關鍵的(de)(de)表(biao)觀遺傳調節因(yin)子，在炎癥(zheng)(zheng)、細胞(bao)分化、神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)再生、癌癥(zheng)(zheng)以及中樞神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)系統(tong)和行(xing)(xing)(xing)為(wei)(wei)反應(ying)等中發(fa)揮(hui)重要(yao)作用。然而，KDM6B在神(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)炎癥(zheng)(zheng)誘發(fa)的(de)(de)焦(jiao)慮(lv)(lv)樣行(xing)(xing)(xing)為(wei)(wei)中的(de)(de)作用知(zhi)之甚少(shao)。本研究探討了(le)KDM6B在LPS誘導(dao)的(de)(de)焦(jiao)慮(lv)(lv)樣行(xing)(xing)(xing)為(wei)(wei)中的(de)(de)潛在作用，并評(ping)估了(le)其是否(fou)與(yu)VGLL4的(de)(de)調控有關。
首先，研(yan)究者使(shi)用(yong)LPS誘導(dao)(dao)小鼠焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)，并測定小鼠海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)和(he)前額皮質中KDM6B和(he)VGLL4的(de)(de)表(biao)達以及小鼠海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)和(he)神(shen)經炎癥的(de)(de)變化，發(fa)現(xian)(xian)海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)KDM6B、VGLL4、IL-1β和(he)Iba-1的(de)(de)表(biao)達水平呈(cheng)LPS劑量依賴式(shi)增(zeng)加(jia)，并伴隨(sui)(sui)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)的(de)(de)增(zeng)加(jia)。接著，分析了KDM6B抑制劑GSK-J4對LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)的(de)(de)改變，發(fa)現(xian)(xian)GSK-J4 處理(li)減弱了LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de) VGLL4、STAT3、IL-1β 和(he) Iba-1的(de)(de)上(shang)調，并減輕了焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)。隨(sui)(sui)后，用(yong)AAV介導(dao)(dao)的(de)(de)VgLL4 shRNA 敲(qiao)低VGLL4，阻止了LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de)小鼠海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)和(he)STAT3、IL-1β 和(he) Iba-1 表(biao)達水平的(de)(de)增(zeng)加(jia)。最(zui)后，發(fa)現(xian)(xian)小膠質細胞抑制劑-米(mi)諾環素(su)（MNC）可以減弱LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)。本研(yan)究發(fa)現(xian)(xian)，LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de)神(shen)經炎癥促進了海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)中KDM6B 的(de)(de)激活，并且(qie)LPS誘導(dao)(dao)的(de)(de)焦(jiao)(jiao)慮(lv)(lv)樣(yang)行(xing)為(wei)與海(hai)馬(ma)區(qu)(qu)中KDM6B誘導(dao)(dao)VGLL4的(de)(de)上(shang)調有關。
圖6. 研究思路
為(wei)(wei)進(jin)一步探究(jiu)VGLL4在LPS誘(you)導(dao)(dao)的(de)焦慮(lv)(lv)樣(yang)(yang)行為(wei)(wei)中(zhong)的(de)作用，作者在LPS注(zhu)射前，使(shi)用AAV介導(dao)(dao)的(de)VGLL4 shRNA對(dui)VGLL4進(jin)行敲(qiao)低(di)(di)處理，通過曠(kuang)場、迷宮等行為(wei)(wei)學測(ce)試(shi)發現，敲(qiao)低(di)(di)VGLL4可(ke)以減(jian)輕LPS誘(you)導(dao)(dao)的(de)小鼠焦慮(lv)(lv)樣(yang)(yang)行為(wei)(wei)。此(ci)外(wai)，LPS誘(you)導(dao)(dao)了海(hai)馬(ma)區STAT3（信號轉導(dao)(dao)和(he)轉錄激(ji)活因子3）表達的(de)增加，而這(zhe)種增加在敲(qiao)低(di)(di)VGLL4后被(bei)逆轉，并(bing)且(qie)VGLL4的(de)敲(qiao)低(di)(di)也顯著(zhu)減(jian)弱了LPS誘(you)導(dao)(dao)的(de)海(hai)馬(ma)區IL-1β和(he)Iba-1的(de)表達。這(zhe)些研(yan)究(jiu)結果(guo)表明，VGLL4和(he)海(hai)馬(ma)中(zhong)的(de)STAT3之間存在促(cu)進(jin)關系，VGLL4通過上調海(hai)馬(ma)中(zhong)的(de)STAT3來促(cu)進(jin)LPS誘(you)導(dao)(dao)的(de)焦慮(lv)(lv)樣(yang)(yang)行為(wei)(wei)。
圖7. VGLL4敲低對LPS誘導的焦慮樣行為和海馬中相關蛋白表達水平的影響
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