1. DD是什么?
“不(bu)穩(wen)定(ding)結(jie)(jie)構域”(destabilizing domains,DD),是(shi)(shi)FK506-雷帕霉素結(jie)(jie)合蛋(dan)白FKBP突變(bian)體L106P,大小(xiao)12kD。當它(ta)與其它(ta)蛋(dan)白融合后(hou),會由泛素-蛋(dan)白酶體系統介(jie)導被(bei)快速組(zu)成型降解(jie)。而當加入細胞滲透性(xing)、能(neng)特異(yi)結(jie)(jie)合DD的(de)小(xiao)分(fen)子配體Shield1時,融合蛋(dan)白不(bu)再被(bei)降解(jie),目的(de)蛋(dan)白恢復行使正常的(de)細胞功能(neng),并且呈(cheng)現可(ke)逆與劑量依賴性(xing)。因(yin)此,DD-Shield1系統能(neng)可(ke)逆控制(zhi)蛋(dan)白表達,也正是(shi)(shi)因(yin)為這一(yi)點,被(bei)認定(ding)是(shi)(shi)一(yi)項(xiang)有前途的(de)技術(shu)正得到廣(guang)泛關注(zhu)。
2. DD和Shield1的(de)關系?
簡單來(lai)說(shuo),DD作為一個(ge)小型不穩(wen)定蛋白與其他蛋白融合后,融合蛋白則被(bei)降解,Shield1則能(neng)(neng)抑(yi)制(zhi)其降解,恢復融合蛋白的表達及生物學功能(neng)(neng)。
3. 生物學意義(yi):
利(li)(li)用蛋(dan)白穩定性的(de)藥物誘導表(biao)達系統(tong)(tong)(DD-Shield1系統(tong)(tong))在活(huo)體(ti)內和(he)體(ti)外使某一基因可(ke)逆表(biao)達,利(li)(li)用這一系統(tong)(tong)可(ke)使因蛋(dan)白失活(huo)而表(biao)型改變的(de)細胞或活(huo)體(ti)表(biao)型得到部分或全部恢復,這為細胞和(he)活(huo)體(ti)生物嚴謹調(diao)控蛋(dan)白功能提(ti)供了一種新的(de)策略。 |
(//obsidiantx.com) |
4.DD-Shield1系統優勢(shi):
快速: 在細胞水平(ping)上,Shield1可在15-30 min內快速(su)調節蛋白(bai)表(biao)達量(liang),相反,在去除(chu)Shield1后,蛋白(bai)降解(jie)的半衰期(qi)可縮(suo)短至30分(fen)鐘;比轉(zhuan)錄開關機(ji)制或RNAi技術(shu)速(su)度更快。
精(jing)確(que): DD-Shield1系統可以(yi)直接(jie)靶定蛋白,,通過調(diao)(diao)節Shield1濃度(du),可以(yi)精確(que)調(diao)(diao)控(kong)融合蛋白的表(biao)達(da)量;
可逆(ni): 它可(ke)(ke)(ke)通(tong)過配(pei)體濃度變化(hua)可(ke)(ke)(ke)逆(ni)調控(kong)蛋白表(biao)(biao)達(da)水平,彌(mi)補了其(qi)他(ta)條(tiao)件性控(kong)制蛋白表(biao)(biao)達(da)的不足,如(ru)Cre-loxP系統和四環素系統所(suo)造(zao)成的干擾是不可(ke)(ke)(ke)逆(ni)的;
5.維真DD-Shield1系(xi)統相(xiang)關服(fu)務:
服務(wu)內容: 維真可將不(bu)穩定(ding)結構域DD連(lian)接在您想要表達的蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)之(zhi)前,構建融合蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)表達載體,協助(zhu)您研究(jiu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)可逆表達給細胞(bao)或者(zhe)動物(wu)所帶來的生物(wu)學影響。
技術支持:
① DD誘導GFP蛋白(bai)的降(jiang)解
|
|
GFP對(dui)照 |
DD-gfp對照 |
分(fen)析(xi):將GFP單獨表達(da)(da)的(de)質粒(li)與(yu)DD-GFP融合表達(da)(da)的(de)質粒(li)分(fen)別轉染293細胞,發現融合不穩(wen)定蛋白DD后,GFP表達(da)(da)明顯降低; 說明,DD誘(you)導了(le)GFP蛋白的降解; |
② shield1可完全或(huo)者(zhe)部分恢(hui)復GFP的表達
DD-gfp |
|
|
|
Shield1 |
(-) |
+(24h) |
+(48h) |
分析:與無配(pei)體(ti)處理的(de)細(xi)胞相(xiang)比,加入Shield1 配(pei)體(ti)(1μM)后(hou),細(xi)胞中GFP恢(hui)復表(biao)達,且呈現一(yi)定的(de)時間依賴性。 |