蛋(dan)白磷酸化攻(gong)略大(da)全
前幾日，我們為大家介紹了關于反相蛋白微陣列RPPA的有關知識（『江湖召集令』癌癥相關蛋白及磷酸化水平大數據等你來分析！），利用RPPA技術可以同時分析成百上千種細胞或者組織樣本中不同蛋白的表達情況，包含修飾后蛋白（如磷酸化、甲基化、乙酰基化）的差異表達比對分析，那么，關于蛋白質翻譯后修飾你了解多少呢，蛋白質磷酸化究竟又是怎么一回事？今天，小V就和大家一起來探索有關蛋白質磷酸化的那些事兒！
蛋白質翻譯后修飾(PTMs)在生命體中具有十分重要的作用，它使蛋白質的結構更復雜，功能更完善，調節更精細，作用更專一。蛋白翻譯后修飾包括：磷酸化、糖基化、甲基化、羥基化、脂酰化、羧基化等共價修飾。其中，蛋白磷酸化是非常常見和非常重要的翻譯后修飾之一，它在每個生物的各個方面都扮演著重要的角色，例如基因轉錄、表達、細胞增殖、分化、凋亡、信號轉導、免疫調控、腫瘤發生等。
一．蛋白磷酸化簡介(jie)
蛋(dan)白(bai)磷酸(suan)(suan)(suan)化是在酶的(de)(de)催(cui)化作用(yong)下，將ATP γ位的(de)(de)磷酸(suan)(suan)(suan)基(ji)團，轉移至蛋(dan)白(bai)質(zhi)氨基(ji)酸(suan)(suan)(suan)側鏈上的(de)(de)過程(cheng)(cheng)。該過程(cheng)(cheng)是可逆的(de)(de)，催(cui)化蛋(dan)白(bai)質(zhi)發生(sheng)磷酸(suan)(suan)(suan)化的(de)(de)酶被稱為蛋(dan)白(bai)激酶（protein kinase, PK），而催(cui)化蛋(dan)白(bai)質(zhi)去(qu)磷酸(suan)(suan)(suan)化的(de)(de)酶被稱為蛋(dan)白(bai)磷酸(suan)(suan)(suan)酶（protein phosphatase, PPase）（圖1）。蛋(dan)白(bai)磷酸(suan)(suan)(suan)化是調節和(he)控制蛋(dan)白(bai)質(zhi)活性和(he)功能的(de)(de)重要機制。
圖1：蛋白質(zhi)磷酸化(hua)和去磷酸化(hua)的過程（圖片(pian)來源于網絡）
二．蛋白磷酸化(hua)分類及位點
蛋白(bai)磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)是生物(wu)體內(nei)普遍存在的一(yi)種調節方式。據(ju)報道，人類(lei)(lei)基(ji)因(yin)組(zu)編(bian)碼的21000個(ge)蛋白(bai)質(zhi)中，90%以上(shang)發(fa)生了磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)。根據(ju)被磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)的氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)不(bu)同，蛋白(bai)質(zhi)磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)可分為 4 大類(lei)(lei)，具體分類(lei)(lei)和(he)磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)位(wei)點見表1，磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)的9個(ge)氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)分子(zi)式見圖(tu)2。超過三分之一(yi)的蛋白(bai)磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)(hua)發(fa)生在絲(si)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、蘇氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)和(he)酪氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)上(shang)：其中絲(si)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)最(zui)多（86.4%），其次是蘇氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)（11.8%），酪氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)最(zui)少(shao)（1.8%）。絲(si)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、蘇氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)和(he)酪氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)的磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)組(zu)成了(le)O-磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)。O-磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)在酸(suan)(suan)性(xing)條件下非常穩(wen)定，因此(ci)在細胞生(sheng)物學和磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)蛋(dan)白質(zhi)組(zu)學中研究(jiu)廣泛。而N-磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)由于(yu)不穩(wen)定導致其檢測極具挑戰性(xing)。加之(zhi)，催化(hua)(hua)N-磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)的(de)蛋(dan)白激酶(mei)和蛋(dan)白磷(lin)酸(suan)(suan)酶(mei)的(de)缺(que)乏進一步限制了(le)它(ta)的(de)研究(jiu)。其他兩類磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)（S-磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)和酰基磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)）的(de)研究(jiu)報道卻少(shao)之(zhi)又少(shao)。
表1：蛋(dan)白(bai)磷酸化(hua)類型及位點
圖(tu)2：磷酸化的9個氨基酸分子式
（B. Huang et al. International Journal of Biological Macromolecules 145 .2020）
三(san)．蛋白磷酸化(hua)相關酶
人類基(ji)因組中約(yue)有500多(duo)種(zhong)激酶和200多(duo)種(zhong)磷(lin)酸(suan)酶能調(diao)控蛋白的(de)磷(lin)酸(suan)化(hua)過程(cheng)，這(zhe)使得蛋白磷(lin)酸(suan)化(hua)更為復(fu)雜，這(zhe)些磷(lin)酸(suan)化(hua)相關酶在精細調(diao)控生物體的(de)眾(zhong)多(duo)細胞(bao)過程(cheng)中可發揮(hui)關鍵作(zuo)用。
1、蛋白激酶
蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)屬于(yu)激(ji)(ji)酶(mei)大家族，是一類磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)轉移(yi)酶(mei)，負責將ATP γ位(wei)的磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)基(ji)(ji)團(tuan)轉移(yi)至底物蛋白(bai)(bai)質的特定氨(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)，從而使(shi)蛋白(bai)(bai)質磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)化，進而發(fa)揮生理生化功能(neng)。在人類基(ji)(ji)因組中(zhong)，大約(yue)2%的人源(yuan)基(ji)(ji)因編碼518個(ge)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)。根(gen)據其磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)化的氨(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)(ji)不(bu)同，蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)可以(yi)分為五大類：絲氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)/蘇氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)、酪(lao)氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)、組氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)/賴氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)/精氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)、半胱氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)和天冬(dong)氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)/谷氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)蛋白(bai)(bai)激(ji)(ji)酶(mei)。
2、蛋白磷酸酶
蛋(dan)白(bai)(bai)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)的(de)功能跟蛋(dan)白(bai)(bai)激酶(mei)(mei)的(de)功能相反(fan)，負(fu)責磷(lin)(lin)酸(suan)化蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)去(qu)磷(lin)(lin)酸(suan)化。目(mu)前，大(da)約有226種已知的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)。蛋(dan)白(bai)(bai)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)分(fen)為(wei)3個(ge)家族(zu)：磷(lin)(lin)酸(suan)蛋(dan)白(bai)(bai)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)家族(zu)、金屬依賴性蛋(dan)白(bai)(bai)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)家族(zu)和蛋(dan)白(bai)(bai)酪(lao)氨(an)酸(suan)磷(lin)(lin)酸(suan)酶(mei)(mei)家族(zu)。
四．蛋白磷酸(suan)化的(de)檢測方法
蛋(dan)白質磷(lin)(lin)(lin)酸化(hua)(hua)的分析(xi)和磷(lin)(lin)(lin)酸化(hua)(hua)位點(dian)的鑒(jian)定已成為目前蛋(dan)白質組學研究(jiu)的關注點(dian)之(zhi)一。目前蛋(dan)白質磷(lin)(lin)(lin)酸化(hua)(hua)的檢測方法(fa)主要有特異性抗體（如western blot）、p32放射性標記、質譜、化(hua)(hua)學生物相結合、核磁共振等。每種方法(fa)有其各自的優缺點(dian)（表2），研究(jiu)人員可(ke)根(gen)據(ju)實驗(yan)設計挑選合適的檢測方法(fa)。
表2：蛋白質(zhi)磷酸化檢(jian)測方法的比較
（B. Huang et al. International Journal of Biological Macromolecules 145 .2020）
五(wu)．定點突變在蛋白磷酸化研究中的作用
定點突(tu)(tu)(tu)變(bian)(bian)(bian)可以隨心所欲地(di)改(gai)變(bian)(bian)(bian)已知DNA序(xu)列中(zhong)的堿基(ji)。在(zai)基(ji)礎研(yan)究(jiu)中(zhong)，科(ke)研(yan)工作者通(tong)常需要通(tong)過(guo)改(gai)變(bian)(bian)(bian)DNA序(xu)列獲(huo)得突(tu)(tu)(tu)變(bian)(bian)(bian)基(ji)因(yin)，以研(yan)究(jiu)基(ji)因(yin)結構與功(gong)能(neng)之間的關(guan)(guan)系；或者通(tong)過(guo)改(gai)變(bian)(bian)(bian)氨(an)基(ji)酸(suan)序(xu)列獲(huo)得突(tu)(tu)(tu)變(bian)(bian)(bian)蛋(dan)白，以研(yan)究(jiu)蛋(dan)白質結構和功(gong)能(neng)的關(guan)(guan)系，從微觀水(shui)平闡明生理狀態下基(ji)因(yin)的調(diao)控(kong)機理、疾病的病因(yin)和發病機制。在(zai)磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋(dan)白的研(yan)究(jiu)中(zhong)，構建(jian)模擬磷(lin)酸(suan)化(hua)和非磷(lin)酸(suan)化(hua)的突(tu)(tu)(tu)變(bian)(bian)(bian)實驗是研(yan)究(jiu)磷(lin)酸(suan)化(hua)功(gong)能(neng)效(xiao)應(ying)的一種(zhong)常用方(fang)法。
1. 磷(lin)酸化位點的查找
磷(lin)酸化(hua)定點突變實驗的(de)第一步首先要查找磷(lin)酸化(hua)位點。我(wo)們(men)以常用的(de)蛋白數據庫UniProt為例說明，具體步驟如下：
（1）通過//www.uniprot.org/鏈接(jie)進(jin)入UniProt官網，進(jin)入如下(xia)主界面：
（2）以人源p53蛋白為例，在Search欄（見上(shang)圖紅色(se)標記位置(zhi)）中(zhong)輸入p53，進入如下界面：
（3）點(dian)擊人源p53蛋白在數據庫(ku)中的(de)編號“Q04637”（上圖紅色(se)箭(jian)頭(tou)所示(shi)），查看(kan)(kan)專家注(zhu)釋(shi)。這里重點(dian)介紹“PTM/Processing”。點(dian)擊下圖左邊紅色(se)箭(jian)頭(tou)指向(xiang)的(de)“PTM/Processing”欄(lan)查看(kan)(kan)分(fen)子加工(gong)、氨基酸修飾、翻譯后修飾、蛋白組學數據庫(ku)、翻譯后修飾數據庫(ku)和參考文獻。
（4）假如(ru)我們對15位(wei)的(de)(de)磷酸化位(wei)點修(xiu)飾，點擊紅色圈中的(de)(de)15即可查看對應的(de)(de)氨基酸序列(lie)（見(jian)下(xia)圖，黃色標(biao)記的(de)(de)“S”）。
（5）接下來，我(wo)們返回上一頁面，點(dian)擊數據庫中的(de)(de)“Names & Taxonomy”選項查(cha)找該基(ji)因(yin)的(de)(de)mRNA序列(lie)，點(dian)擊藍色標記的(de)(de)基(ji)因(yin)名即可查(cha)閱該基(ji)因(yin)的(de)(de)詳細信息(xi)。
（6）p53的mRNA序列查找可點擊黃(huang)色(se)箭頭處獲取：
2. 表征磷(lin)酸化修飾(shi)的定點突變(bian)
1）表征(zheng)磷(lin)酸化修(xiu)飾的突變氨基酸
通過第2部分磷酸(suan)化(hua)類型(xing)的(de)介紹，我們知道Ser、Thr和Tyr殘基上的(de)磷酸(suan)化(hua)較(jiao)常見，特別是Ser。根據文獻(xian)報道，表征(zheng)這3種磷酸(suan)化(hua)修飾的(de)定點突變(bian)見表3：
表(biao)(biao)3：表(biao)(biao)征Ser、Thr和Tyr磷酸化(hua)修飾的突變氨基酸
2）表征磷酸化修(xiu)飾的原理
蛋白質的(de)(de)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)導(dao)致磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)基(ji)(ji)團受體(ti)氨基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)上(shang)增加了凈負電荷(he)（pSer，pThr和(he)pTyr帶(dai)2個(ge)負電荷(he)【見上(shang)述圖2】）。而(er)取代(dai)的(de)(de)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)性(xing)氨基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)（Glu和(he)Asp）的(de)(de)負電荷(he)側鏈在一定程度上(shang)模(mo)擬(ni)了蛋白質中磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)基(ji)(ji)團的(de)(de)添(tian)加，且長度相(xiang)似。為了使(shi)得實驗結果準確，除了構(gou)建模(mo)擬(ni)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)的(de)(de)突變體(ti)外，模(mo)擬(ni)非(fei)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)的(de)(de)點突變構(gou)建也是必需(xu)的(de)(de)，即磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)基(ji)(ji)團受體(ti)氨基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)被(bei)一個(ge)不(bu)帶(dai)電的(de)(de)和(he)不(bu)能磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)的(de)(de)氨基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)所取代(dai)。目(mu)前(qian)，Ala和(he)Phe已(yi)成(cheng)功模(mo)擬(ni)非(fei)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)化(hua)。
3）如何(he)選擇(ze)表征(zheng)磷酸化修飾(shi)的(de)突變氨(an)基酸？
表征磷(lin)酸(suan)化(hua)修飾的(de)(de)(de)突(tu)變氨基(ji)酸(suan)選(xuan)擇(ze)(ze)主(zhu)要(yao)從(cong)氨基(ji)酸(suan)的(de)(de)(de)長度、大小(xiao)、電荷(he)和結(jie)構方面(mian)選(xuan)擇(ze)(ze)。例如，與磷(lin)酸(suan)化(hua)的(de)(de)(de)氨基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)相比，Glu或Asp除了帶1個負(fu)電荷(he)外，還可能(neng)占據更(geng)小(xiao)或不同的(de)(de)(de)空間(jian)。因此，在許多(duo)情況下，Glu可能(neng)比更(geng)小(xiao)的(de)(de)(de)Ala能(neng)更(geng)好地(di)模擬(ni)pSer。但是(shi)，注意不是(shi)所有情況，這2種氨基(ji)酸(suan)均已成功模擬(ni)pSer。再比如，對(dui)于非磷(lin)酸(suan)化(hua)的(de)(de)(de)模擬(ni)，Ala經常(chang)被作為(wei)取代的(de)(de)(de)氨基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)。但是(shi)，對(dui)于非磷(lin)酸(suan)化(hua)的(de)(de)(de)Tyr，Phe可能(neng)是(shi)一個更(geng)好的(de)(de)(de)的(de)(de)(de)選(xuan)擇(ze)(ze)。
六．應用實(shi)例
實例一(yi) 蛋(dan)白磷(lin)酸化(hua)與肝自噬
2018年10月(yue)，浙江大學醫學院劉教(jiao)授(shou)課題組在Molecular Cell(IF=15.584)雜志發(fa)表了題為(wei)“mTORC1-Regulated and HUWE1-Mediated WIPI2 Degradation Controls Autophagy Flux”研究論文，該論文從(cong)采用質(zhi)譜(pu)確(que)定WIPI2新的(de)互作(zuo)蛋白(bai)出發(fa)，經體內(nei)外實(shi)驗(yan)發(fa)現mTORC1 & WIPI2 &HUWE1三者之間的(de)調控(kong)關系、功能(neng)效(xiao)應(ying)、生(sheng)物效(xiao)應(ying)和生(sheng)理功能(neng)：WIPI2是mTORC1新的(de)磷酸(suan)化底物。mTORC1通過磷酸(suan)化WIPI2，促進WIPI2與(yu)其E3泛素(su)連接酶HUWE1的(de)相互作(zuo)用，導致WIPI2的(de)泛素(su)化和經蛋白(bai)酶體的(de)降解，最(zui)終抑制自噬，調控(kong)模型示意(yi)圖見圖3。
圖3：mTORC1 & WIPI2 &HUWE1在(zai)細胞自噬中的調控(kong)示(shi)意圖
在這里，我(wo)們重點展示作者體內生(sheng)理(li)功能的(de)(de)科研成果，這部(bu)分研究(jiu)涉(she)及到模擬磷(lin)酸化和非(fei)磷(lin)酸化突變體的(de)(de)構建(jian)，而(er)(er)且非(fei)常(chang)榮幸的(de)(de)是，本部(bu)分研究(jiu)所用AAV產(chan)品由維(wei)真生(sheng)物(wu)助力。首先，作者饑餓(e)處理(li)小(xiao)鼠(shu)(shu)12h&24h，通(tong)過(guo)Western Blot發現(xian)肝(gan)臟中的(de)(de)WIPI2蛋白(bai)量(liang)增(zeng)加(jia)，而(er)(er)磷(lin)酸化的(de)(de)WIPI2卻(que)減少(shao)。為了獲得WIPI2磷(lin)酸化調(diao)控小(xiao)鼠(shu)(shu)肝(gan)自噬的(de)(de)直接證據，作者使用rAAV-WIPI2, rAAV-WIPI2-S395A, or rAAV-WIPI2-S395D腹腔注(zhu)射(she)小(xiao)鼠(shu)(shu)，4周(zhou)后發現(xian)WIPI2-S395A蛋白(bai)量(liang)增(zeng)加(jia)，而(er)(er)WIPI2-S395D卻(que)減少(shao)；而(er)(er)且，與WT-WIPI2相(xiang)比，WIPI2-S395A而(er)(er)不是WIPI2-S395D明(ming)顯降低了P62和NBR1的(de)(de)蛋白(bai)量(liang)。此外，腹腔注(zhu)射(she)rAAV-shHUWE1的(de)(de)小(xiao)鼠(shu)(shu)LC3 puncta、WIPI2的(de)(de)蛋白(bai)量(liang)和P62&NRB1的(de)(de)降解(jie)均表現(xian)出了增(zeng)加(jia)（圖4）。
圖(tu)4：mTORC1介導的WIPI2磷酸化在(zai)小鼠肝臟中調控細胞自噬
實驗參數
實例二 蛋白磷酸化(hua)與細胞遷移、增值和分化(hua)
幾乎在同一時間(jian)，香港浸(jin)會大(da)學的(de)張老師課題組在Cell Death Discov(IF=4.114)雜志發表了(le)題為“Oleanolic acid enhances neural stem cell migration, proliferation, and differentiation in vitro by inhibiting GSK3βactivity”研(yan)究論文，揭(jie)示了(le)齊墩果酸(OA)通過(guo)抑制GSK3β活性(xing)促進神經(jing)干細胞的(de)遷移、增殖(zhi)和(he)分化，此(ci)項工作成果對于治療(liao)神經(jing)退行性(xing)疾病具有(you)重要(yao)的(de)意(yi)義。
首(shou)先，作(zuo)者(zhe)(zhe)通(tong)過(guo)神(shen)經(jing)球形成實(shi)(shi)驗(yan)證明(ming)OA增加NSCs的遷移；通(tong)過(guo)CCK-8實(shi)(shi)驗(yan)和(he)神(shen)經(jing)球形成實(shi)(shi)驗(yan)證實(shi)(shi)了OA促進NSCs的增殖；通(tong)過(guo)western blot和(he)免疫熒光實(shi)(shi)驗(yan)揭(jie)示了OA促進NSCs分化為神(shen)經(jing)元。接(jie)著，作(zuo)者(zhe)(zhe)通(tong)過(guo)分子對接(jie)表明(ming)GSK3β是OA作(zuo)用的直接(jie)靶基因。最后，作(zuo)者(zhe)(zhe)通(tong)過(guo)western blot和(he)構建非磷(lin)酸化突變體（維真生(sheng)物助力(li)腺病毒）揭(jie)示了本論文(wen)主(zhu)題，實(shi)(shi)驗(yan)結果見圖5。
圖(tu)5：齊墩果酸(OA)通過抑制GSK3β活性促(cu)進(jin)神經干細胞(bao)的增殖和分化
[注：Nestin (NSCs marker)；MAP2 (microtubule-associated protein-2, neuron marker)；GFAP(astrocytes marker)]
實驗參數
維真生物助力蛋白質磷酸化研究
維真生物已建(jian)成(cheng)了18000余(yu)種人(ren)源(yuan)(yuan)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)現貨(huo)克(ke)(ke)隆庫(ku)與(yu)12000余(yu)種人(ren)源(yuan)(yuan)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)腺病(bing)(bing)毒(du)(du)庫(ku)，并(bing)(bing)有(you)(you)蛋白(bai)激酶與(yu)磷(lin)酸(suan)酶的(de)(de)克(ke)(ke)隆子(zi)庫(ku)，可(ke)(ke)為(wei)您(nin)(nin)提供(gong)蛋白(bai)質(zhi)磷(lin)酸(suan)化(hua)相關基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)克(ke)(ke)隆與(yu)腺病(bing)(bing)毒(du)(du)；我(wo)們(men)還建(jian)成(cheng)了靶向(xiang)(xiang)13000余(yu)種小(xiao)鼠(shu)(shu)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)gRNA pool 克(ke)(ke)隆庫(ku)，同樣地，我(wo)們(men)也(ye)有(you)(you)蛋白(bai)磷(lin)酸(suan)化(hua)相關基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)gRNA pool克(ke)(ke)隆子(zi)庫(ku)，您(nin)(nin)可(ke)(ke)直接包裝AAV，搭配(pei)spCas9的(de)(de)轉基(ji)(ji)因(yin)小(xiao)鼠(shu)(shu)，完成(cheng)基(ji)(ji)因(yin)在體(ti)內的(de)(de)精準調控，所以如(ru)果您(nin)(nin)有(you)(you)基(ji)(ji)因(yin)喪失方向(xiang)(xiang)的(de)(de)實驗需求，這款產品將是您(nin)(nin)的(de)(de)理(li)想選擇！此外(wai)，我(wo)們(men)還有(you)(you)靶向(xiang)(xiang)700余(yu)種人(ren)源(yuan)(yuan)激酶的(de)(de)gRNA慢病(bing)(bing)毒(du)(du)文庫(ku)，配(pei)合(he)CAS9慢病(bing)(bing)毒(du)(du)或CAS9穩定細(xi)胞系(xi)，可(ke)(ke)實現快速高(gao)通量地篩選。不僅如(ru)此，我(wo)們(men)還可(ke)(ke)以根據您(nin)(nin)的(de)(de)實驗需求進行磷(lin)酸(suan)化(hua)相關基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)定點突變，并(bing)(bing)為(wei)您(nin)(nin)提供(gong)下游的(de)(de)病(bing)(bing)毒(du)(du)包裝和基(ji)(ji)因(yin)檢測服務等。
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1、人源蛋白(bai)激酶與磷酸酶的現貨(huo)克(ke)隆子(zi)庫(ku)
2、鼠源蛋白激酶與磷酸酶的gRNA pool現貨克隆子庫
3、人源蛋白激(ji)酶的gRNA慢病毒文庫
4、人源蛋(dan)白激(ji)酶與磷酸(suan)酶的(de)現貨腺病毒
5、蛋白磷酸化(hua)相關基因(yin)定點突(tu)變、干擾和(he)敲(qiao)除(chu)
6、蛋白磷(lin)酸化相關基(ji)因慢(man)病(bing)(bing)毒、腺病(bing)(bing)毒、AAV包裝
7、基因的表(biao)達(da)分析服務...
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